Jornal de Biomarcadores Moleculares e Diagnóstico

Organoides de células-tronco em culturas primárias de cólon humano maligno e não maligno

Abstract

Sahrish Tariq, Muhammad Tahseen, Mariam Hassan, Muhammad Adnan Masood, Shahid Khattak, Aamir Ali Syed, Asad Hayat Ahmad, Mudassar Hussain, Muhammed Aasim Yusuf, Chris Sutton e Saira Saleem

Objetivos: Uma subpopulação de células denominadas células-tronco cancerígenas (CSCs) que iniciam e promovem o crescimento tumoral foi demonstrada como existente em várias malignidades, incluindo carcinoma de cólon. O objetivo do nosso estudo piloto foi isolar CSCs CD133+CD26+CD44+ de tumores de cólon de pacientes, esferas de cultura ou organoides e observar sua proliferação em culturas primárias. Culturas paralelas de controles não cancerígenos de revestimento normal de cólon e pólipos não adenomatosos foram estabelecidas.

Métodos: A triagem de células ativadas magneticamente foi usada para isolar populações de células CD133+CD26+CD44+ seguida por cultura de células primárias sob condições de cultura de células-tronco. Número, células/organoides e gerações filhas de organoides foram calculados usando microscópio de contraste de fase. O método de exclusão de azul de tripano foi usado para testar a viabilidade das células.

Resultados: Tanto o tumor de cólon quanto o pólipo não adenomatoso de cólon formaram organoides flutuantes em suspensão; no entanto, as culturas de pólipos não adenomatosos não mostraram propriedades de autorrenovação por mais de 1 passagem. A suspensão normal de células únicas de cólon não criou organoides. Os tumores de cólon metastáticos produzem rapidamente organoides de células cancerígenas em menos de 24 horas em números maiores em comparação com os tumores de cólon não metastáticos (1-3 semanas). Os organoides de tumores de cólon metastáticos têm a capacidade de proliferação por até cinco gerações filhas em cultura primária, em comparação com três gerações para aqueles cultivados a partir de tumores não metastáticos.

Conclusões: Este modelo organoide CSC in vitro ajudará a estudar a biologia do câncer de cólon, em particular fornecendo uma fonte valiosa de tecido derivado de células primárias para estudar perfis moleculares personalizados usando estratégias 'ômicas para direcionar a intervenção terapêutica.