Jornal de Biomarcadores Moleculares e Diagnóstico

ClC-3 está envolvido na apoptose induzida por NPPB em células de câncer de próstata DU145

Abstract

Jian-hua Zhang, Jun Liu, Yun-jian Liao, Nan-lin Xiang, You-wei Huang, Zhi-quan Bai, Yun Luo, Jie-ying Wu, Zeng-Wu, Xi Lin e Jin-ming Di

O ácido NPPB3-(4-5-nitro-2-(3-fenilpropilamino) benzoico, como um dos bloqueadores de canais de cloreto mais comumente usados, é muito essencial para estudos de canais de cloreto. No entanto, o papel do NPPB na mediação da apoptose é incerto. O objetivo deste estudo foi investigar o mecanismo de apoptose do NPPB em linhas de células de câncer humano DU145. A viabilidade celular foi examinada pelo ensaio MTT. A sonda fluorescente JC-1 foi usada para detectar o potencial de membrana l. A apoptose celular foi determinada pelo método de fluxo (FCM). A expressão da proteína relacionada à apoptose Caspase-3, caspase-3 clivada, PARP, PARP clivada, Bcl-2, Mcl-1, Bcl-xl, Bcl-w e Bax foi detectada por western blotting. A taxa de proliferação celular foi notavelmente inibida 2 h após o tratamento com NPPB (50,100 μmol/L) (p<0,01); Método de citometria de fluxo A análise mostrou que a taxa de apoptose em cada grupo tratado foi significativamente maior, especialmente para a promoção do efeito da taxa de apoptose precoce foi significativamente (P < 0,05); Imagens de JC-1 mostraram que NPPB levou à diminuição do potencial de membrana mitocondrial intracelular; Os resultados do Western blot mostraram que a via de sinalização caspase-3/PARP foi ativada, enquanto a expressão de caspase-3 clivada, PARP clivada foi significativamente aumentada (P < 0,01). PARP, como substrato da caspase-3, foi significativamente diminuída (P < 0,05). Bcl-2, Bcl-xl comparados com o grupo de controle não apresentaram diferença significativa, e a proteína anti-apoptótica Mcl-1 (P < 0,05) e Bcl-w (P < 0,01) diminuíram significativamente, a proteína pró-apoptótica Bax (P < 0,01) foi obviamente regulada positivamente. Nossas descobertas indicaram que o NPPB pode aumentar a apoptose em linhas de células DU145 por meio da via apoptótica relacionada à mitocôndria, e os resultados seguintes mostraram que os canais de cloreto de ClC-3 envolvidos no processo de NPPB induziram a apoptose de células DU145.