Journal of Blood & Lymph

Seleção e otimização de microRNAs de referência exossômicos circulantes para estudos quantitativos de PCR em tempo real de fluidos corporais suínos

Abstract

Qiang Pu, Lin Wang, Guojun Kang, Changbao Liu, Changfeng Yang, Jia Luo e Yongfu Huang

Os miRNAs exossômicos circulantes liberados em todos os fluidos corporais têm funcionalidade e estabilidade incríveis. Sua expressão está associada a múltiplas condições patológicas, podendo ser usados ??como biomarcadores informativos ao avaliar e monitorar o estado fisiopatológico do corpo. Entretanto, não há consenso sobre miRNAs de referência para referência exossômica circulante e normalização de abundância. O presente estudo teve como objetivo quantificar 16 miRNAs de referência potenciais em dez fluidos corporais suínos usando qRT-PCR. Além disso, sua estabilidade foi quantificada pela combinação de múltiplas ferramentas estatísticas padrão-ouro, incluindo BestKeeper, GeNorm e NormFinder. Os miRNAs identificados foram classificados de forma abrangente. O miRNA mais bem classificado foi recomendado como o miRNA de referência ideal para normalização de dados. Para identificar genes mais estáveis, os fluidos corporais foram divididos em três grupos com base no ponto de coleta, eles são in vivo (bile, fluido da bexiga e suco gástrico), in vitro (colostro, leite comum, sêmen e urina) e no sangue (UVBP, UABP e PBS). Os miRNAs de referência exossômicos circulantes ideais mais estáveis ??nos fluidos corporais foram let-7b-5p (miR-93) na bile, miR-92a no fluido da bexiga, miR-93 no suco gástrico, let-7b-5p no colostro, miR-92a no leite e urina comuns, miR-25 no sêmen, let-7b-5p na UVBP, miR-25 na UABP e U6 na PBS. No geral, miR-93, miR-451 (miR-92a) e miR-25 são os miRNAs de referência genuínos para normalização de dados qRT-PCR de fluidos corporais in vivo, in vitro e sangue, respectivamente. Em todos os fluidos corporais, miR-451 foi o mais estável ao determinar a abundância de miRNA nos exossomos circulantes